张建军

　　禽脑脊髓炎(Avian encephalomyelitis, AE)是由禽脑脊髓炎病毒(AEV)引起的以侵害幼禽中枢神经系统为主要特征的传染病，鸡、火鸡、野鸡、鹌鹑均可感染本病，其临床疾病特征为病禽共济失调、震颤和非化脓性脑脊髓炎。该病1930年首先发现于美国罗德岛(Rhode island)，后传至美国新英格兰地区，故又被称为“新英格兰病”；1932年又根据发病雏鸡特征性头颈震颤，称为“禽流行性震颤”。1938年Van Rockel等根据实验性分类，将其定名为“禽脑脊髓炎”。

　　该病现已遍及世界大多数国家。我国1980年以来，先后在广东、江苏、辽宁、黑龙江、河北、内蒙古、福建、上海等省市区发生。禽脑脊髓炎病毒主要侵害1－4周雏鸡，6周龄以上的鸡受感染后一般不表现临床症状。

　　禽脑脊髓炎病毒为小RNA病毒科肠道病毒属成员，但最近有研究提示其与甲肝病毒属较近，并建议将其列入该属。病毒基因组为+ssRNA，病毒无囊膜，平均直径为26.1±0.4nm；氯化铯浮密度为1.31-1.33g/mL。目前仅有两株AEV全基因组序列被测定,病毒基因组全长为7058bp或7059bp，拥有一个开放阅读框编码一个大多聚蛋白，然后多聚蛋白经病毒蛋白酶加工剪接成为成熟蛋白。。和其它的小RNA病毒科成员一样，AEV蛋白也包括有基因组P₁区的4个结构蛋白（VP4-VP2-VP3-VP1）和P₂,P₃区的7个非结构蛋白（2A-2C和3A-3D），其中结构蛋白VP4和VP2由前体蛋白VP0切割而来，非结构蛋白分别编码病毒的蛋白酶、病毒RNA聚合酶、病毒合成的引物Vpg以及与病毒复制有关的蛋白成分。最近有研究证明结构蛋白VP3，非结构蛋白2C皆能诱导细胞的凋亡，非结构蛋白3A还与膜的相互作用有关。Tannock和Shfren最初检测到该病毒的四个结构蛋白（VP1-4），分子量分别为43kD，35kD，33kD，14 kD，后来证明分子量为43kD的蛋白不是病毒的结构蛋白，而是由于用鸡胚复制病毒时污染的卵清蛋白。

　　AEV既可经蛋垂直传播，也可在禽群间水平传播，该病毒各分离株之间虽然在物理、化学和血清学特性上并无差异，但病毒却有两种病理型（pathotype）:一种以自然分离株为代表，为嗜肠道型，经粪口感染；另一种为鸡胚适应株，具有高度嗜神经性，除非高剂量，一般不经粪口传播，不能经水平传播，AEV在无抗体的鸡胚上多次传代后,可适应鸡胚，如经在脑内反复接种而获得的Van Rockel株。两种病变型病毒均可在易感鸡胚中复制，但自然株并不引起胚体的明显损伤。 嗜神经型AEV通过非胃肠途径接种可引起各种年龄鸡发病，病毒主要在中枢神经系统复制，在肠道中复制水平低，不足以通过粪便排毒，接种鸡胚后出现特征性的胚体病变：胚体萎缩、运动性减弱、爪卷曲、肌营养不良以及脑软化等。嗜肠道型AEV可经口感染，病毒主要在肠道中复制，并经粪便排出体外，通过接触或传播媒介造成鸡群内或群间的水平传播。

　　两种病理型病毒都能在来自易感鸡群的胚上复制，但自然株不引起明显的症状或大体病变；适应株对胚有致病性，引起肌肉营养不良和骨骼肌运动抑制。接种后3-4d可在鸡胚脑中检出病毒，接种后6-7天病毒滴度可达到高峰，感染了各种鸡胚适应病毒的胚，其病理组织学变化的特征相同，包括脑软化和肌肉营养不良，但病变程度、位置有差异。肌肉的变化主要是嗜酸性肿胀和坏死、断裂，受侵害的肌纤维横纹消失并偶尔出现肌膜增生和异嗜性白细胞浸润。神经病变的特征是局部严重水肿、神经胶质增生、血管增生和细胞固缩。病毒能在来自易感鸡群的雏鸡、胚和多种细胞培养上繁殖。除了雏鸡脑内接种的病例外，鸡和胚必须来自易感群。鸡胚接种可以采用几种途径，但一般选择卵黄囊途径。仅适应株可以引起大体病变。1967年，Mancini和Yates在鸡胚脑细胞培养中首次成功繁殖了AEV的VR株。随后鸡胚成纤维细胞、肾细胞、神经胶质细胞和雏鸡胰细胞也被用于病毒适应株和野毒株的培养，病毒滴度，特别是自然毒株，一般较低，且未见细胞病变。病毒在细胞培养中的繁殖可采用鸡胚接种进行检测，或者采用免疫荧光和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测病毒抗原。Nicholas等证明鸡胚神经胶质细胞是生产AEV抗原的绝好材料，适用于各种血清学方法如免疫扩散和ELISA。Shafren和Tannock比较了VR株、一株野毒和疫苗株在鸡胚脑细胞培养的生长情况，感染2天后，VR株的滴度比其他的毒株高8-10倍，且病毒大多数为细胞结合型。Abe未能证明AEV能够在已建立的哺乳类细胞系上的复制，刘爵等报道AEV能在BGM-70传代细胞系（幼素领猴肾细胞）上增殖。

　　病原的分离和鉴定：接种雏鸡其他组织，虽然也能引起发病，但脑是分离病毒的极好来源。Mryamae发现除了脑以外，胰脏和十二指肠也是特别可靠的病毒来源。检测病毒的方法之一就是经卵黄囊接种5-7日龄的胚（来自易感鸡群），然后继续孵化，观察10日龄前雏鸡的发病症状。当临床症状出现时，检查脑、前胃和胰的病理组织学病变。另外，可用免疫荧光检测患鸡的脑、胰和十二指肠的病毒抗原或以琼脂扩散试验检查特异性病毒抗原。自从报道单克隆抗体可识别AEV的共同抗原表位后，各种单克隆抗体介导的方法已被建立，在疫苗效价测定及其他实验中很有价值。

　　Berger先用AEV感染鸡胚的脑组织培养物，然后用间接荧光抗体（FA）试验检测病毒抗原。他发现这种方法比鸡胚接种法更敏感。Nicholas等比较了几种检测AEV的方法。接种脑细胞培养后用间接FA检测比较方便，但接种两周龄易感鸡后采用ELISA和琼脂扩散试验检测血清则更敏感些。他们认为后者是病毒检测可选择的方法。

血清学：可采用标准VN试验、间接FA试验、琼脂扩散试验和ELISA等方法检测感染AEV的鸡产生的抗体。

　　用鸡胚适应的VR株病毒来确定血清或血浆的中和能力，把病毒稀释液与血清混合，经卵黄囊接种6日龄胚，感染后10-12天检查特征性病变。NI.为1.1或更高为阳性，可认为以前感染过AEV。近期感染鸡群取得的样品中，NI在1.5-3.0之间。感染后第2周就可以检查出抗体，且至少在几个月内维持在较高水平。Calneck和Jehnich报道在许多情况下，禽体内检测不到VN抗体（NI小于1.1），但能抵抗高达10000 EID₅₀病毒的脑内攻击。

　　另一个确定鸡群免疫力的方法就是鸡胚易感性（ES）试验，将来自被实验鸡群的受精蛋进行孵化，同时孵化已知来自易感染群的蛋作为对照。6天后，每个胚经卵黄囊接种100 EID₅₀胚适应毒。感染后10-12天，检查胚的特征性病变。若100 %胚有病变，则认为鸡群易感，若低于50 %的有病变，则认为有免疫力。中间的数字应被看为不确定的，可能表示近期的感染。

　　20世纪50年代中期，Schaaf通过免疫接种首次成功地控制了本病。1960年，Calneck等阐明了AE的流行病学，随后很快研制了口服疫苗。

　　在种鸡的育成期间接种疫苗，能控制鸡群成熟后不发生感染，因而，也能预防由蛋传途径引起病毒的扩散。在易感的头2-3周，母源抗体能保护雏鸡抵抗AEV的感染。商品产蛋鸡群也可以进行免疫接种，以防由AE引起的一过性产蛋下降。灭活疫苗，可用于开产鸡或者限制使用活疫苗的地区。多数鸡群可以用鸡胚繁殖的活病毒如1143株免疫，它可以通过自然途径如饮水和喷雾免疫。活疫苗可冷冻或冻干保存，与野毒一样容易在鸡群内传播。给鸡群中的一小部分鸡经口服用，然后传播给其他鸡，但这种方法对笼养鸡的效果不令人满意。Shafren等发现给10%的鸡点眼免疫与全群饮水免疫的血清学反应相同。经翅膀刺种AEV给鸡群免疫可能带来出现临诊症状的危险，一般8周龄后进行接种，最迟在产蛋前4周接种。

　　用于活毒疫苗的病毒株不发生鸡胚适应是非常重要的，其原因有二：第一、鸡胚适应毒丧失了通过肠道感染的能力，因而通过自然发生途径免疫不再有效；第二、鸡胚适应毒和野毒株一样，经翅膀刺种时，可引起临床症状。Glisson和Fletcher发现经翅膀刺种途径接种鸡胚繁殖的AEV苗，引起临诊性脑脊髓炎，最可能的解释是在制造过程中疫苗病毒偶然发生了鸡胚适应。在生产疫苗时，仔细检测接种鸡胚的特征表现，可检测出是否发生适应，用口服接种在易感鸡传代，可排除疫苗种毒中的鸡胚适应毒。