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张建军

　　我国是水禽生产大国，尤其是养鹅业，2002年我国鹅肉产量占世界鹅肉总产量92.16%，不但产量高，而且品种全，有12个品种之多。近年来随着产业结构的调整，养鹅业发展的速度更快。由于小鹅瘟等几种烈性传染病的较高的发病率和致死率，造成了巨大经济损失，严重影响养鹅业的健康发展，受到国内外畜牧兽医工作者的广泛关注。

小鹅瘟是由鹅细小病毒(Goose arvovirus, GPV)引起的雏鹅急性或亚急性败血性传染病。该病是我国学者方定一于1956年首次在江苏扬州发现，60年代以来，在欧洲、亚洲等国家相继报道该病的发生与流行。1974年，国际禽病学会(WPSA)正式将该病命名为Derzsys氏病。该病主要侵害出壳后4~20日龄的鹅雏，也感染鸭雏，传播速度快，发病率和死亡率较高，特别是近年来在我国的一些省、市、自治区均有流行，给养鹅业造成严重危害。

　　据病程的长短分为最急性型、急性型和亚急性型。最急性型常见于1周龄以内的雏鹅，表现为突然发病死亡，鼻孔有少量浆液性分泌物，喙端发绀和蹼色泽变暗。急性型常发于1~2周龄的雏鹅，表现为食欲减少或丧失，行动迟缓，无力，站立不稳，喜蹲卧，多饮水。排出黄白色或黄绿色稀粪，内含气泡，或纤维碎片。张口呼吸，鼻孔有棕褐色或绿褐色分泌物。喙端发绀和蹼色泽变暗。眼结膜干燥，全身有脱水征象，病程一般为2天左右，有些临

死前出现神经症状。亚急性型多见于流行后期，2周龄以上的雏鹅，表现为精神萎顿，消瘦，拉稀，少食或拒食，鼻孔周围沾污多量分泌物和饲料碎片。病程一般为3~7天。

　　GPV属细小病毒科细小病毒属，病毒外观呈圆形或六角形，无囊膜，二十面体对称，直径约20~25nm，空心内直径为15nm，外壳厚5nm，对角直径为25nm。具有感染性的病毒粒子为110S，缺少DNA的病毒粒子为65S。GPV对外界因素具有很强的抵抗力，56℃加热1h仍能使鹅胚死亡。病毒对乙醚、氯仿、胰酶有抵抗力，对紫外线敏感。

　　GPV属于自主性细小病毒，无需辅助病毒可自主复制。其基因组是在被感染细胞的染色体复制开始以后在细胞核内合成。因此，必须在细胞培养同时接种病毒，这样才能达到使病毒增殖的目的。GPV的复制主要在细胞核内进行，并形成大型包涵体，在细胞培养物中隐藏期约10~16h，接种后10~24h，在病毒DNA合成的同时，形成细胞核内抗原并出现病毒粒子。

　　小鹅瘟病毒是一种单链DNA(ssDNA)病毒，含有正链DNA的病毒粒子和含有负链DNA的病毒粒子数目基本相等，在病毒的核酸提取过程中，正链DNA和负链DNA很易发生退火形成互补的双链DNA。截止2003年12月，在世界生物基因数据库注册的GPV全长或部分基因序列有20条，其中基因组全序列有2条，由匈牙利的ZadoriZ分别在1995年和2003年注册，全长均为5106bp，有4个基因，其中3个分别是结构蛋白(病毒衣壳蛋白)VP1、VP2和VP3的基因，另一个为功能蛋白，即REP蛋白的基因。REP蛋白基因位于537bp~2420bp之间，共有1884bp；VP1基因位于2439bp~4637bp之间，含有2199bp；VP2基因位于2874~4637bp，含有1764bp；VP3基因位于3033bp~4637bp之间，含有1605bp；非基因组全序列有18条，其中8条是由美国的Li.M分别在2002年和2003年注册的（有4条的序列长度为1386bp，另4条为1884bp）；美国的Dahiyat.B在2003年注册2条，分别为1386bp和1884bp，有6条为GPV3部分基因的序列，538bp，由台湾的Chang.P.C在2002年注册；有1条是由中国上海的Ge.Y等于2001年注册的非结构蛋白和结构蛋白基因的全序列，4101bp，编码非结构蛋白（NS）REP蛋白和结构蛋白（VP），前者基因长度1884bp，后者长度2199bp；还有一条是美国的Brow.K.E于1995年注册的鹅细小病毒非结构蛋白NS1和衣壳蛋白VP1的基因，全长3434bp。编码非结构蛋白(NS1)的基因1886bp，编码结构蛋白VP1的基因2028bp。

　　目前已知小鹅瘟病毒基因编码的蛋白质2类4种，即非结构蛋白和结构蛋白。1种是非结构蛋白（NS），即REP蛋白，3种结构蛋白，即VP1，VP2，VP3，是GPV的三种衣壳蛋白。其中VP2、VP3是主要衣壳蛋白，是病毒的主要保护性抗原，可以诱导机体产生免疫反应。REP蛋白627aa，由rep基因编码，是基因复制和表达的调控蛋白；VP1，732aa，VP2，587aa，VP3，534aa，分别由VP1基因、VP2基因和VP3基因编码。

　　对于VPs的表达，国内外学者对GPV结构蛋白的体外原核、真核表达进行了探索，有的成功地构建了真核或原核表达载体，有的成功地进行了原核和真核表达。这些工作为基因工程疫苗的研制奠定了基础，但目前尚未见有关GPV基因工程疫苗的报道。Tekahara K等将GPV编码衣壳蛋白VP1的基因克隆到杆状病毒转移载体构建成重组杆状病毒，此重组病毒表达了一种分子量与VP1蛋白相当的88KD的蛋白质，且用免疫印迹法检测此蛋白。通过间接荧光抗体（IFA）实验表明，表达蛋白在重组体病毒感染的昆虫细胞核中显示为大的颗粒，且在电子显微镜下在细胞核中显示为一些大的颗粒。李雪梅等将GPV主要结构蛋白（VP2-VP3）基因克隆到核酸疫苗质粒pIRES1neo载体上，构建了核酸疫苗重组质粒pIGVP1，转染鹅胚成纤维细胞，经Westernblot检测其表达产物可出现特异性反应带，证明表达产物具有很好的反应原性。此外，她还将GPV长春分离株的主要结构蛋白（VP2-VP3）基因克隆到原核表达载体PET28（a），构建了原核表达载体Pegvp1，转化宿主菌BL21，经IPTG诱导，SDS-PAGE检测到75KD和58KD表达蛋白带，Westernblot分析表明，表达蛋白具有很好的特异性。